熒光定量PCR儀每個(gè)循環(huán)包括這三個(gè)關(guān)鍵步驟

　　熒光定量PCR儀是功能強(qiáng)大的定量PCR平臺(tái)，可提供可靠的性能、靈活性和可擴(kuò)展性，可滿足臨床診斷實(shí)驗(yàn)室不斷變化的需求。它兼容多種快速更換模塊，如96孔、96孔快速、384孔以及不同通量的微陣列芯片反應(yīng)模塊，讓用戶可以隨意選擇實(shí)驗(yàn)通量方案。

　　熒光檢測(cè)采用PMT傳感器，靈敏度高，光譜帶寬大，功能強(qiáng)大，具有定性、定量、基因變異、基因表達(dá)、熔解曲線等分析功能。儀器控溫性能，升溫速率≥5.0℃/s，可實(shí)現(xiàn)單份檢測(cè)，檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍100～1010份。熒光定量PCR儀無邊緣效應(yīng)，無光路校正，頂部激發(fā)/檢測(cè)，非接觸式測(cè)量，試劑適應(yīng)性強(qiáng)，的自診斷和自檢測(cè)功能，使用維護(hù)方便，長(zhǎng)壽命LED光源，穩(wěn)定的發(fā)射波長(zhǎng)和免維護(hù)。

　　熒光定量PCR儀每個(gè)循環(huán)包括這三個(gè)關(guān)鍵步驟。通常，它運(yùn)行40個(gè)周期。

　　1、幼化：雙鏈DNA通過高溫孵育“溶解”成多肽鏈，單鏈DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)松動(dòng)。一般DNA聚合酶可以承受較大的溫度（一般為95℃）。如果免費(fèi)模板的GC含量高，時(shí)間會(huì)有所提高。

　　2、熱處理：在整個(gè)熱處理過程中，與開放閱讀框的緊密接觸有機(jī)會(huì)引起雜交雜交。因此，解鏈溫度（TM）應(yīng)根據(jù)計(jì)算個(gè)人所得稅的引物設(shè)計(jì)，并選用合適的溫度（一般比引物設(shè)計(jì)的TM低5℃）。

　　3、擴(kuò)寬：70-72℃中間，DNA聚合酶活性為，引物加寬速度可達(dá)每秒100個(gè)堿基。隨即，熒光定量PCR中擴(kuò)增的精彩畫面就小了。通常，該步驟與溫度為60°C的熱處理步驟相結(jié)合。使用隨機(jī)引物設(shè)計(jì)或寡核苷酸(DT)和隨機(jī)引物設(shè)計(jì)化學(xué)品。用于cDNA轉(zhuǎn)化的溫度取決于所選的RT酶。逆轉(zhuǎn)錄后，將約10%的cDNA轉(zhuǎn)移到單獨(dú)的試管中進(jìn)行及時(shí)的熒光定量PCR。